树突状细胞(Dendritic Cells,DC)广泛分布于血液、肝、脾、淋巴结及其他非免疫器官组织中,是目前已知递呈功能最强的抗原呈递细胞(Antigen-presenting cells, APC),也是唯一能刺激初始T细胞反应的APC,在免疫反应中起着关键的引导和调节作用。但DC在机体内分布散,含量少,在外周血中比例还不到白细胞的1%,从体内分离DC不仅费时费力,而且得到的数量很少,所以体外扩增成为DC研究和应用的必经之路。
DC经体外大量扩增培养、肿瘤抗原致敏后,回输给患者,可促进患者T细胞增殖分化为细胞毒性T细胞、同时激活B淋巴细胞,全程启动抗体免疫系统产生高效而特意的抗肿瘤。
DC体外扩增方法
目前DC主要是用细胞因子从骨髓、外周血和脐带血的DC前体细胞定向诱导、分化并扩增而得。骨髓和脐带血的采集不方便,大规模应用受到限制,外周血由于取材简单,不需要复杂的筛选和纯化过程,所用细胞因子组合少,故为大多数研究人员采用,并已逐渐形成了相对固定的培养模式,是目前获得DC的较好途径。
DC的分化发育是在细胞因子组合的环境中完成的,DC的前体细胞在不同微环境、不同细胞刺激因子和不同诱导分化途径中,可分化为成熟度各异的细胞亚群。研究发现,髓样DC(myeloid dendritic cell,MDC),也称DC1,与单核细胞和粒细胞有共同的前体细胞,DC1在经GM-CSF、IL-4体系培养后往往只能生成不成熟的DC,需要附加其他炎症因子如TNF-α、IFN-β、IFN-γ、IL-6及PGE2等,才可以产生成熟的DC。
而常规的DC诱导培养中GM-CSF、IL-4和TNF-α,被认为是最重要的3大细胞因子,其中GM-CSF促成DC生成、IL-4作用是抑制DC前体细胞向CD14+巨噬细胞分化,而是分化为CD14-/CD1a-未成熟DC;而加入TNF-α后,DC前体细胞即向成熟表型CD1a+/CD83+ DC分化。
淋巴样DC(Lymophiod dendritic cells,LDC)或浆细胞样DC(plasmacytoid DC,pDC),即DC2,与T细胞和NK细胞有共同的前体细胞。LDC经GM-CSF、IL-4可以直接诱导出具有成熟表型的DC,另外,FLT-3配体作为一种能够刺激早期造血的细胞因子,可以调节最原始的造血干/祖细胞的增殖和分化,与GM-CSF、IL-4、TNF-α及IFN-γ联合应用,可促进来自骨髓的CD34+祖细胞分化、发育产生DC。
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