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EZ4U – Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay/细胞增殖和毒性检测试剂
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    刘经理

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    湖北 武汉市 洪山区

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    体外诊断、细胞库 / 细胞培养、试剂、抗体、ELISA 试剂盒、实验室仪器 / 设备

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遗传毒性检测方法 2——UmuC 试验

903 人阅读发布时间:2023-08-02 09:54

UmuC 原理

Umu 试验,即 SOS/umu 试验是,为了以一种高效和具有成本效益的方式进行环境监测开发的,特别是用于检测水和废水的遗传毒性。最初的设计方法是在试管中进行,现在适用于微孔板,并扩展到其他类型的样品 (例如化学品、环境样品和药品)。
 

正常状态下,菌体的 SOS 调节系统被 LexA 蛋白维持在抑制状态。当菌体 DNA 损伤(由于辐射或化学物质)时,使无活性的 RecA 蛋白被激活 , 激活的 RecA 蛋白可与单链 DNA(ssDNA) 结合形成 RecA/SDNA 核蛋白体, 后者介导 LexA 自我剪切, LexA 蛋白水平下降可诱导 SOS 调节子大量转录 LexA 基因, 同时也激活原被 LexA 蛋白阻止的 SOS 相关基因 umuC 和 umuD 基因。RecA 被转化为作用于 LexA 的蛋白酶,从而抑制(激活)SOS 系统,该系统反过来激活许多 DNA 修复基因,包括 umu 操纵子的基因。


新闻图片1


UmuC 检测菌株-基因型

UmuC 试验检测用菌株为鼠伤寒杆菌 TA1535,携带质粒 pSK1002,携带一个融合的 umuC」lacZ 基因。在该菌株中,lacZ 由于 umu 操纵子的激活而上调,表达出有 β 半乳糖苷酶活性的融合蛋白。根据此酶分解邻硝基本 β-D-半乳糖苷(ONPG)的产物颜色深浅,通过定量检测被诱导酶的数量,判断 DNA 是否受损伤及受损伤的程度。


UmuC 分析描述

细菌暴露于 96 孔板中的不同浓度和低浓度的待测样品、阳性对照和阴性对照。随后进行孵育,2-3 内通过分光光度计读数量化 umuC 启动子的激活情况。

通过公式计算 β-半乳糖苷酶的活性和存活率。β-半乳糖苷酶的表达呈剂量依赖性和显著增加(与足够的生存相关),表明该样本导致了 DNA 应激。

通过肝匀浆、去线粒体上清的 S9 分别进行代谢激活后,样品的诱变潜力可被直接评估。其结果基本上与 Ames 试验相同。


新闻图片2


即用型试剂盒或单独组分?

即用型检测试剂盒,包括菌株、培养基、氨苄青霉素、S9、阳性对照,以 96 孔液体微孔板格式 UmuC Easy CS 提供。即用型试剂盒由菌株的表型、阳性对照以及大鼠肝微粒体部分 S9 进行质量控制,因此是一个更标准化的系统。持续进行 S9 和阳性对照的稳定性研究、生长控制、毒性研究。

该产品还可用于 HPTLC(高效薄层色谱)方法,以提高灵敏度和/或允许后续的生物或物理分析。

UmuC Easy CS 试剂盒单独组分也有销售。

 

产品信息

品牌产品名称产品编号规格
XenometrixTest Kit UmuC Easy CSG06-118-P192 measurements, 6 Samples / Kit, if tested in duplicates, 8 different concentrations, +/- S9, positive and negative control
XenometrixAroclor 1254 induced lyophilized rat liver S9PRS-AC011 ml
XenometrixAroclor 1254 induced lyophilized rat liver S9PRS-AC022 ml
XenometrixPhenobarbital/β-Naphtoflavone induced lyoph. rat liver S9PRS-PB000.4 ml
XenometrixPhenobarbital/β-Naphtoflavone induced lyoph. rat liver S9PRS-PB011 ml
XenometrixPhenobarbital/β-Naphtoflavone induced lyoph. rat liver S9PRS-PB022 ml
XenometrixS9-100/1537 Booster SolutionPRS-BB010.5 ml
XenometrixS9 Cofactor Kit for Ames MPF, Ames IIPCO-0800Kit
XenometrixAmes MPF 98/100 AquaJ05-2105 Sample Kit for water samples when tested in the following conditions: 2 strains (TA98, TA100), +/- S9, 3 Replicates, 6 Doses, Positive & Negative Controls. Includes Strains, Media, Ampicilline.

 

UmuC -参考文献

1. Oda Y, Nakamura S, Oki I, Kato T, Shinagawa H. 1985. Evaluation of the new system (umu- test) for the detection of environmental mutagens and carginogens. Mut Res. 147(5):219–29.
2. Nakamura S, Oda Y, Shimada T, Oki I, Sugimoto K. 1987. SOS-inducing activity of chemical carcinogens and mutagens in Salmonella typhimurium TA1535/pSK1002: Examination with 151 chemicals. Mut Res. 192(4):239–46.
3. Reifferscheid G, Heil J, Oda Y, Zahn RK. 1991. A microtitre version of the SOS/umu-test for rapid detection of genotoxins and genotoxic potentials of environmental samples. Mut Res. 253(3):215–22.
4. Reifferscheid G, Heil J. 1996. Validation of the SOS/umu test using test results of 486 chemicals and comparison with the Ames test and carcinogenicity data. Mut Res. 369(3–4):129–45.
5. Meyer D, Marin-Kuan M, Debon E, Serrant P, Cottet-Fontannaz C, Schilter B, Morlock GE. 2020. Detection of low levels of genotoxic compounds in food contact materials using an alternative HPTLC-SOS-Umu-C assay. ALTEX. 38(3):387–97.

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