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公司新闻/正文
乳汁免疫原来也有细胞因子的参与
410 人阅读发布时间：2021-12-02 09:24
初乳中的淋巴细胞在哺乳期间发挥着许多重要作用，包括保护新生仔猪免受感染。在哺乳前和哺乳期间，淋巴细胞不断从母体的血液进入乳腺。然而，关于母体淋巴细胞穿过乳腺进入乳汁的机制知之甚少。
近期，南京农业大学动物医学院的杨老师课题组在J Reprod Immunol上发表的一篇名为“Mechanism of transepithelial migration of lymphocytes into the milk in porcine mammary glands”，对该机制进行了深入研究，并取得了一定进展。
近期，南京农业大学动物医学院的杨老师课题组在J Reprod Immunol上发表的一篇名为“Mechanism of transepithelial migration of lymphocytes into the milk in porcine mammary glands”，对该机制进行了深入研究，并取得了一定进展。
1. 研究概述
本次研究通过采用免疫荧光染色法和流式细胞分选技术检测母猪初乳中的母体淋巴细胞，并观察到淋巴细胞向乳腺腺泡腔的转移。此外，免疫组化染色显示CD3+ T、γδ+ T和IgA+ B细胞主要位于乳腺基底部。同时，该区域分布着较多的泌乳腺泡和毛细血管。最后，建立了乳腺上皮细胞（EpH4-Ev）/T细胞共培养系统，探讨淋巴细胞在乳腺上皮细胞间迁移的机制。有催乳素存在时，EpH4-Ev细胞中CCL2和CCL28的表达显著增加，这有助于淋巴细胞的迁移。该研究结果为更好地理解乳汁免疫的概念，并为妊娠猪的诱导乳汁免疫的疫苗接种策略铺平了道路。
2.实验方法
用T细胞分离试剂盒从60日龄猪肠系膜淋巴结中分离猪淋巴细胞，然后用羧荧光素琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记。将EpH4 EV细胞调节至10^6/ml，以2×10^5个细胞每cm^2密度接种于倒置Transwell细胞培养小室上。5小时后，将过滤器倒置并在37℃下培养。当EpH4 Ev细胞形成稳定的TEER时，标记的T细胞被种于Transwells™ 的上室。同时将催乳素、CCL2（购自乔默生物/CHAMOT）或CCL28加入下室。12小时后，Transwells™ 小心取出，进行免疫荧光分析。Transwells™ 用PBS洗涤5次，然后在4℃下用1%多聚甲醛固定30分钟。在PBS中与5% BSA孵育1h后，加入抗紧密连接蛋白1一抗（ZO-1），4℃孵育过夜。再加入相应的二抗孵育1小时。用DAPI（蓝色）染色后， 共聚焦显微镜下观察Transwells™。此外，收集下室上清液，4℃ 340g离心15分钟，然后用荧光抗CD3抗体染色细胞。
3. 实验结果
为了评估CCL2和CCL28在单核细胞和中性粒细胞向乳腺上皮细胞迁移中的作用，我们将每种趋化因子添加到Transwells™系统。结果表明，CCL2和CCL28都增加了迁移细胞的数量（图6B，F）。同时，通过共聚焦显微镜观察，CCL2和CCL28也促进了细胞的迁移。
总之，该研究结果表明，催乳素的使用刺激了MECs产生CCL2和CCL28，从而促进了淋巴细胞的迁移。此外，研究结果也提供了对催乳免疫概念的更好理解，并为开发促进诱导妊娠猪催乳免疫的疫苗接种策略提供思路。此外，猪乳腺与人类乳腺在形态上有许多相似之处，因此本次研究结果可能对人类免疫有启示。
内容源自：
Peng Liu, Penghao Zhang, and Chen Yuan etc.Mechanism of transepithelial migration of lymphocytes into the milk in porcine mammary glands. J Reprod Immunol. 2021 Oct 29;149:103440.(IF: 4.054)
文章详情获取，请点击：
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0165037821001704